熒光分光光度法在維生素B1含量測定上的應用

摘要： 維生素B1又名硫胺素，在植物性食物中分布極廣，谷類種子表皮中含量更為豐富， 麥麩、酵母、米糠等均是維生素B1的良好來源。檢測其含量也有著許多的方法。其中熒光分光光度法是對熒光物質進行定性和定量的有效方法，它是維生素B1含量測定的一個比較常用的方法。

本文以測定食品中維生素B1（硫胺素）元素含量為例，依據GB/T5009. 84-2003《食品中硫胺素（維生素B1 ）的測定》，應用港東F-380型熒光分光光度計對維生素B1含量進行測定。結果證明此方法操作簡便，線性良好是測定維生素B1含量的理想方法。

關鍵詞： 熒光分光光度法 維生素B1硫胺素食品

?原理

硫胺素在堿性鐵氰化鉀溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外線照射下，噻嘧色素發出熒光。在給定的條件下，以及沒有其他熒光物質干擾時，此熒光之強度與噻嘧色素量成正比，即與溶液中硫胺素量成正比。

?實驗條件

儀器及附件：

天津港東 F-380 型熒光分光光度計

熒光石英比色皿

分析條件：

激發波長：365nm

發射波長：435nm

藥品：

正丁醇、無水硫酸鈉、淀粉酶、鹽酸、乙酸鈉、氯化鉀 、氫氧化鈉 、鐵氰化鉀 、乙酸 、硫胺素標準儲備液（0.1mg/mL）等。

其它：

分析天平（0.0001g） 、容量瓶、鹽基交換柱（填充活 性人造沸石） 、三角瓶、移液管、具塞比色管、擦鏡紙、磁力攪拌器、pH計等。

樣品及標準樣品的制備

樣品溶液的制備：

（1）樣品提取

（2）提取液凈化

（3）凈化液氧化 （避光暗環境）

標準溶液的制備：

（1）硫胺素標準儲備液（0.1mg/mL）：

精確稱取100mg經氯化鈣干燥24小時的硫胺素，溶于0.01mol/L鹽酸中，稀釋至1000mL。(于冰箱中避光保存）。?

（2）硫胺素標準中間液（10μg/mL）：

取10mL硫胺素標準液，用0.01mol/L鹽酸稀釋至100mL于冰箱中避光保存。

（3）硫胺素標準使用液（0.1μg/mL）：

將硫胺素標準中間液用水稀釋用水稀釋至100倍，用時現配。

標準曲線待測液

（1）標準溶液

將20mL硫胺素標準使用液（0.1μg/mL）加入交換柱以代替樣品提取液，即得到標準凈化液。(做三份)

（2）標準待測液

進行標準凈化液的氧化過程，得到標準空白溶液A、標準溶液B（各三份，用作平行）。

? 計算公式

X——試樣中硫胺素含量，單位為毫克每百克（mg/100g）；

U——試樣熒光強度；

Ub——試樣空白熒光強度；

S——標準熒光強度 ；

Sb——標準空白熒光強度；

c——硫胺素標準使用液濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V——用于凈化的硫胺素標準使用液體積，單位為毫升（mL）；

V1——試樣水解后定容之體積，單位為毫升（mL）；

V2——試樣用于凈化的提取液體積，單位為毫升（mL）；

m——試樣質量，單位為克（g）；

? ——試樣含量由微克每克（μg/g）換算成毫克每百克（mg/100g）的系數

?測定結果

應用港東F-380型熒光分光光度計的“光度測定”模塊，分別讀取待測溶液的熒光強度，根據計算公式得到樣品維生素B1 的含量。

?結論

采用熒光分光光度法測定維生素B1含量，操作簡單，方法準確，是一種理想的方法。

由于維生素B1待測液遇光不穩定， 因此實驗對儀器的功能要求高。港東F-380型熒光分光光度計率先在硬件上采用了激發側擋光快門的設置，從而避免了樣品被強光的直接照射，使整個實驗操作簡便，結果重現性良好。

This information is subject to change without notice.

? Tianjin Gangdong Sci&Tech.Development Co., 2011

Printed in CHINA, September 1, 2011

天津港東科技股份有限公司

TIANJIN GANGDONG SCI.&TECH.MENT CO.,LTD

www.rosensaul.com

電? ? 話：? 022-83712598-830

傳? ? 真：? 022-83711608

郵? ? 編：? 300384

電子郵箱： application@tjgd.com

網? ? 址： www.rosensaul.com

地? ? 址：天津市華苑產業園區鑫茂科技園G座EF單元二層