熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用

熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用

天津港東科技股份有限公司-應用分析部

摘要：?維生素B2又名核黃素，在食品中以游離形式或磷酸酯等結合形式存在。膳食中的主要來源是各種動物性食品，其次是植物性食品的豆類和新鮮綠葉蔬菜。檢測其含量也有著許多的方法，其中熒光分光光度法是對熒光物質進行定性和定量的有效方法，它是維生素B2含量測定的一個比較常用的方法。

本文以測定多維片中維生素B2（核黃素）元素含量為例，依據GB/T 5009.85-2003《食品中核黃素（維生素B2）的測定》，應用港東F-380型熒光分光光度計對多維片中維生素B2含量進行測定。結果證明此方法操作簡便，線性良好是測定多維片中維生素B2含量的理想方法。

關鍵詞：熒光分光光度法 ?維生素B2核黃素 ?多維片

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·?原理

核黃素在 440nm～500nm 波長光照射下發生黃綠色熒光。在稀溶液中其熒光強度與核黃素的濃度成正比。在波長 525nm 下測定其熒光強度。試液再加入低亞硫酸鈉（Na 2 S 2 O 4 ），將核黃素還原為無熒光的物質，然后再測定試液中殘余熒光雜質的熒光強度，兩者之差即為多維片中核黃素所產生的熒光強度。

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·?實驗條件

1、儀器及附件：

天津港東 F-380 型熒光分光光度計

熒光石英比色皿

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2、分析條件：?

? ??激發波長：440nm

? ??發射波長：525nm

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3、藥品：

????硅鎂吸附劑（60～100 目）、乙酸鈉、木瓜蛋白酶、淀粉酶、鹽酸、氫氧化鈉、低亞

? ??硫酸鈉（Na 2 S 2 O 4 ）、洗脫液（丙酮、冰乙酸、水）、高錳酸鉀、過氧化氫、核黃素標準溶液（純度 98%）等。

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4、其他：

電熱恒溫培養箱、高壓消毒鍋、分析天平（0.0001g）、容量瓶、鹽基交換柱、三角瓶、瓷坩堝、移液管、刻度試管、具塞比色管、試管架、擦鏡紙、滴管、量筒、磁力攪拌器、pH 計等。

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·?樣品及標準樣品處理

??? 特別注意：整個操作過程需避光進行

1、樣品溶液的制備

（1）樣品提取

? ??① 水解

? ???② 酶解

? ??③ 過濾

（2）氧化去雜質

（3）核黃素的吸附和洗脫

2、標準溶液的制備

（1）核黃素標準儲備液（25μg/mL）：

? ? 將標準品核黃素粉狀結晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。經過 24 小時后，

? ??準確稱取精確稱取 50mg，置于 2L 容量瓶中，加入 2.4mL 冰乙酸和 1.5L 水。將容量瓶置

? ??于溫水中搖動，待其溶解，冷至室溫，稀釋至 2L，移至棕色瓶內，加少許甲苯蓋于溶液表面，于冰箱中避光保存。

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（2）核黃素標準使用液（1μg/mL）

吸取 2.00mL 核黃素標準儲備液（25μg/mL），置于 50mL 棕色容量瓶中，用水稀釋至

刻度。避光，貯存于 4℃冰箱，可保存一周。

3、空白溶液

待測試樣及標準的熒光值測量后，在各管的剩余液（約 5～7mL）中加入 0.1mL20%的低亞硫酸鈉溶液（Na 2 S 2 O 4 ），立即混勻，在 20s 內測出各管的熒光值，作為各自的空白值。

·?測定結果

應用港東 F-380 型熒光分光光度計的“波長掃描”模塊，分別讀取待測溶液熒光強度，根據計算公式得到樣品維生素B 2 的含量。

·?測定結果

應用港東 F-380 型熒光分光光度計的“光度測定”模塊，分別讀取待測溶液的熒光強度，根據計算公式得到樣品維生素B2的含量。

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·?結論

采用熒光分光光度法測定多維片中維生素B2含量，操作簡單，方法準確，是一種理想的方法。

由于維生素B2待測液遇光不穩定，因此實驗對儀器的功能要求高。港東 F-380 型熒光分光光度計率先在硬件上采用了激發側擋光快門的設置，從而避免了樣品被強光的直接照射，使整個實驗操作簡便，結果重現性良好。